發(fā)布時(shí)間: 2017-09-18 點(diǎn)擊次數(shù): 3758次
海克隆胎牛血清的使用所產(chǎn)生的常見(jiàn)問(wèn)題
由于血清營(yíng)養(yǎng)豐富,貯存條件特殊,因此在貯存和使用過(guò)程中容易產(chǎn)生以下問(wèn)題:
1、改變培養(yǎng)液的pH值
??寺√ヅQ宓膒H理論值為7.0~8.0,培養(yǎng)基在加入規(guī)定量的碳酸氫鈉后(即達(dá)到細(xì)胞生長(zhǎng)所需要的滲透壓),再加入10%的海克隆胎牛血清,一般會(huì)使培養(yǎng)液的pH值發(fā)生改變。因此在使用過(guò)程中應(yīng)注意pH的變化,如有必要可用1mol/L NaOH或1mol/L HCl調(diào)pH到所需值。
2、由于??寺√ヅQ?/strong>的營(yíng)養(yǎng)成分豐富,非常適合細(xì)菌、真菌和支原體等生長(zhǎng)。??寺√ヅQ宕蟛糠植捎檬止し盅b,因此容易把微生物帶入而使得血清被污染。使用前如果沒(méi)有及時(shí)發(fā)現(xiàn),將會(huì)把污染物帶入正在培養(yǎng)的細(xì)胞中,而使得細(xì)胞不能正常生長(zhǎng)。
3、??寺√ヅQ?/strong>在貯存解凍過(guò)程中會(huì)產(chǎn)生沉淀,這是由于海克隆胎牛血清中含有大量脂蛋白、纖維蛋白及多肽類(lèi)物質(zhì),在-15℃冷凍保存解凍后就會(huì)自然形成沉淀,隨著保存時(shí)間的延長(zhǎng),沉淀量會(huì)增加。因此在融化血清時(shí)一般應(yīng)先在4℃放置使之解凍,然后放在室溫使血清*融化,以避免沉淀的增加。添加??寺√ヅQ鍟r(shí)應(yīng)避免把沉淀加入培養(yǎng)液,否則由于沉淀的存在會(huì)使得所培養(yǎng)的細(xì)胞產(chǎn)生大量黑點(diǎn),或者細(xì)胞表面將會(huì)覆蓋一層油狀物質(zhì),影響細(xì)胞的正常生長(zhǎng)。為減少??寺√ヅQ宓膿p失,可以把有沉淀的血清收集起來(lái)進(jìn)行離心處理,將上清液加入培養(yǎng)液使用(一般不建議采用過(guò)濾的方法除去沉淀,因?yàn)槌恋頃?huì)堵塞濾膜而無(wú)法過(guò)濾)。